近年来，研究人员发现CRISPR/Cas9的脱靶效应通常与sgRNA密切相关。除了对特定的靶向位点进行编辑外，sgRNA在基因组中也能够容忍5至6个碱基的错配，这可能导致非靶向切割和脱靶效应。这些潜在的脱靶位点在基因组中数量庞大，达到数千个。因此，全面评估全基因组范围内的脱靶效应成为一项重大挑战。

为了解决这一问题，尊龙凯时生物医疗团队结合全基因组测序和生物信息学预测，开发了一种能够全面分析脱靶效应所引起的单核苷酸突变（SNV）、插入缺失变异（Indels）、拷贝数变异（CNV）及结构变异（SV）的技术。近年来，基因组测序技术在脱靶检测中得到了广泛应用。以Kevin等人的研究为例，他们利用全基因组测序和生物信息学分析评估了Cas9的脱靶风险，比较了163个sgRNA在基因编辑小鼠和对照小鼠中的基因组序列及结构变异。通过Cas-OFFinder，他们识别出556,266个潜在的脱靶位点，并最终确认28个脱靶位点，其中9个经过验证为真实脱靶位点。

这一研究表明，尽管真实脱靶位点只占潜在脱靶位点的一小部分，但其风险依然不可忽视。基于这一背景，尊龙凯时推出了全基因组脱靶检测服务，以帮助研究人员更精准地评估基因编辑的风险。我们采用mutect2作为变异分析工具，通过对比基因编辑组和对照组的测序数据，识别SNV和Indels变异。此外，利用Cas-OFFinder预测潜在的脱靶位点，通过将变异分析结果与预测的潜在脱靶位点进行交集分析，能够有效地确定脱靶位点。

除了脱靶效应分析外，我们还使用了CNVkit和manta两种生物信息学分析工具，CNVkit可识别基因组中的拷贝数变化，而manta能够检测插入、缺失和易位等染色体结构变异类型。这些综合结果有助于全面理解基因编辑所引发的染色体结构变异。

相较于GUIDE-seq等体内检测方法，尊龙凯时的全基因组脱靶检测不依赖于ODN插入，为研究人员提供了一种更灵活、便捷的检测手段，并能够分析染色体的大片段变异，从而全面评估基因编辑的效果与风险。作为国内首家提供此类检测服务的公司，尊龙凯时可提供全基因组脱靶检测、GUIDE-seq体内脱靶检测和AID-seq体内脱靶检测等多种服务。如需了解详细信息，欢迎随时咨询尊龙凯时。